它能够确保miRNA在电泳过程中保持单链状态,从而获得清晰的电泳条带,便于后续分析。10 mg/ml的溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)溶液是一种常用的核酸染料,广泛应用于分子生物学实验中,尤其是在DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳检测中。 EB是一种多环芳烃荧光小分子,能够嵌入核酸的碱基对之间。当EB与双链DNA(dsDNA)结合时,荧光强度会增强约25倍,与双链RNA(dsRNA)结合时,荧光强度增强约21倍。这种特性使得EB在低浓度下(如10 µg/ml)染色后无需脱色处理,即可在紫外光下清晰观察到核酸条带。 在使用10 mg/ml EB溶液进行电泳时,通常有两种染色方法: 电泳前染色:在制胶时加入EB,使其工作浓度达到0.5 µg/ml。例如,每100 ml的琼脂糖凝胶溶液中加入5-10 µL的10 mg/ml EB溶液,混匀后倒胶。 电泳后染色:将电泳后的凝胶浸泡在含有0.5 µg/ml EB的电泳缓冲液或水中,染色15-45分钟。 需要注意的是,EB具有较强的诱变性和毒性,操作时应佩戴手套和实验服,避免直接接触皮肤。此外,EB废液应按照实验室标准进行净化处理后再丢弃,以避免环境污染。 Phusion DNA Polymerase适用于多种PCR应用,包括常规PCR、长片段扩增在荧光定量PCR(qPCR)实验中,SYBR Green染料因其高灵敏度和广泛的适用性而被广泛使用。然而,某些qPCR仪器(如某些型号的ABI仪器)需要低浓度的ROX参考染料来校正孔间荧光信号的差异。SYBR Green qPCR Mix (2×, Low ROX)正是为这些特定需求而设计的优化试剂,它结合了SYBR Green的高效性和低浓度ROX的校正功能,为精准定量提供了有力支持。 低浓度ROX的必要性 在qPCR实验中,ROX参考染料通常用于校正荧光信号的非特异性变化,尤其是在高通量实验中。然而,并非所有qPCR仪器都需要高浓度的ROX。某些仪器(如ABI 7500、7900等)在低浓度ROX存在时能够更好地校正孔间差异,从而提高定量的准确性和重复性。SYBR Green qPCR Mix (2×, Low ROX)正是为了满足这些仪器的需求而设计的。 产品特点 优化的反应体系:SYBR Green qPCR Mix (2×, Low ROX)含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq DNA聚合酶以及低浓度的ROX参考染料。 dGTP Solution pH值调节至7.0-7.5,确保在实验中具有高稳定性和反应效率T7 Endonuclease I(T7EI)是一种来源于T7噬菌体的核酸内切酶,能够特异性识别并切割DNA中的错配碱基对、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。这种酶在基因编辑领域,尤其是CRISPR-Cas9技术中,被广泛用于检测基因突变和编辑效率。 功能与特性 错配识别:T7EI能够识别DNA中的不完全配对碱基对,并在错配位点的5'端切割第一、第二或第三个磷酸二酯键。 高特异性:该酶对特定DNA结构具有高度特异性,能够有效区分野生型和突变型DNA。 应用广泛:除了用于基因编辑效果的检测,T7EI还可用于分解四方向交叉DNA、检测或切割异源双链DNA、随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。 在CRISPR基因编辑中的应用 在CRISPR-Cas9基因编辑中,T7EI常用于检测目标基因是否成功引入突变。具体步骤如下: PCR扩增:分别以野生型和突变型DNA为模板,扩增包含突变位点的DNA片段。 变性与退火:将PCR产物变性后退火,形成异源双链DNA。 酶切反应:加入T7EI,在37℃下反应15-30分钟,通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。 Taq DNA Polymerase是一种源自嗜热菌的耐热性DNA聚合酶。在荧光定量PCR(qPCR)实验中,准确性和重复性是实验成功的关键。然而,实验室中的PCR产物污染可能导致假阳性结果,严重影响实验的可靠性。SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus)通过整合尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)技术,提供了一种高效、防污染的qPCR解决方案,确保实验结果的准确性和可靠性。 UDG技术的防污染机制 SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus)的核心优势在于其整合了UDG技术。UDG能够特异性识别并降解含有尿嘧啶(U)的DNA,从而防止实验室中残留的PCR产物污染。在qPCR反应开始前,UDG会降解引物或模板中的尿嘧啶,防止非特异性扩增。而在高温变性步骤中(通常95℃),UDG会迅速失活,不会影响后续的qPCR反应。 产品特点 高效防污染:UDG技术能够有效降解含有尿嘧啶的PCR产物,防止实验室中的残留产物污染,从而减少假阳性结果。 UDG可快速水解单链或双链DNA中的尿嘧啶释放游离尿嘧啶但对RNA或短于6个碱基的DNA寡聚体无活性在现代分子生物学实验中,PCR技术是不可或缺的工具,而Pfu Master Mix (2×) (Without Dye)以其卓越的高保真性和便捷性,成为了众多科研人员的首选试剂。 Pfu Master Mix (2×)是一种预配制的高浓度PCR反应体系,专门用于高保真DNA扩增。它以Pfu DNA聚合酶为核心,这种酶源自嗜热菌Pyrococcus furiosus,具有强大的3'到5'外切酶活性,能够在DNA合成过程中及时纠正错误配对的碱基。这种校正功能使得Pfu酶的保真度远高于传统的Taq酶,特别适合需要高准确性的实验,如基因克隆、突变分析和长片段扩增。 Pfu Master Mix (2×) (Without Dye)的“2×”浓度设计意味着实验人员只需将模板DNA、引物和水加入其中,即可快速配制好反应体系,大大简化了操作步骤。这种预混液不仅节省了时间,还减少了人为误差,确保了反应的均一性和稳定性。同时,无染料配方为后续实验提供了更大的灵活性。实验人员可以根据需要选择是否添加染料,或者直接用于下游应用,如克隆、测序或无染料的凝胶电泳分析。 在琼脂糖凝胶电泳中DL2000DNAMarker可作为分子量标准帮助研究人员快速判断DNA片段的长度在分子生物学和生物医学研究中,逆转录定量PCR(RT-qPCR)是一种广泛使用的高灵敏度和高特异性的基因表达分析技术。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit作为一种一体化的试剂盒,为研究人员提供了一种高效、便捷的一步法RT-qPCR解决方案,特别适用于需要快速、准确检测RNA样本的实验场景。 一步法RT-qPCR的优势 传统的RT-qPCR实验通常需要先进行逆转录反应,将RNA转录为cDNA,然后再进行qPCR扩增。这种方法虽然能够获得准确的结果,但操作步骤繁琐,容易引入误差。而One Step RT-qPCR SYBR Green Kit采用了一步法设计,将逆转录和qPCR扩增整合到同一个反应体系中,大大简化了操作流程,减少了人为误差,提高了实验的重复性和可靠性。 产品特点 高效逆转录酶:该试剂盒含有高效的逆转录酶,能够在短时间内将RNA转录为cDNA,确保逆转录反应的高效进行。 优化的反应体系:试剂盒中的反应体系经过优化,包含SYBR Green荧光染料、热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺等所有必需成分,确保了qPCR反应的高效扩增。 上海保藏生物技术中心是一家有着先进的发展理念,先进的管理经验,在发展过程中不断完善自己,要求自己,不断创新,时刻准备着迎接更多挑战的活力公司,在上海市等地区的化工中汇聚了大量的人脉以及客户资源,在业界也收获了很多良好的评价,这些都源自于自身的努力和大家共同进步的结果,这些评价对我们而言是**好的前进动力,也促使我们在以后的道路上保持奋发图强、一往无前的进取创新精神,努力把公司发展战略推向一个新高度,在全体员工共同努力之下,全力拼搏将共同上海保藏生物技供应和您一起携手走向更好的未来,创造更有价值的产品,我们将以更好的状态,更认真的态度,更饱满的精力去创造,去拼搏,去努力,让我们一起更好更快的成长! |